产品货号:
KD0570
中文名称:
KM71感受态细胞(化转)
英文名称:
KM71 Chemically Competent Cell
产品规格:
10×100μL
发货周期:
1~3天
产品价格:
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产品储存:-80℃保存,6个月有效。
产品组成:
注:本菌株的基因型:arg4 his4 aox1::ARG4,表型:MutS,Arg+。
产品说明:
KM71毕赤酵母自身表型为MutS,所以KM71转化株只能产生出His+MutS菌株。KM71毕赤酵母是组氨酸缺陷型(His4基因型),如果表达载体上携带有组氨酸基因,可补偿宿主菌的组氨酸缺陷,因此可以在不含组氨酸的培养基上筛选转化子。这些受体菌自发突变为组氨酸野生型的概率一般低于10-8。
KM71是毕赤酵母菌株,属于真核细胞。一般的针对原核生物的抗生素例如卡那和氨苄对酵母是无效的,因此为了防止大肠杆菌等原核生物对酵母培养菌株污染,往往会在培养基中加入一些氨苄和卡那霉素的抗生素,来抑制细菌菌的污染和生长。可以在YPD培养基中生长,或者在补充有组氨酸的minimal media中生长,但是无法在单独的minimal media培养基中生长。毕赤酵母适宜的生长温度是28至30℃,一般可以设置在30℃培养,温度超过32℃对蛋白的表达是有害的,并可能导致细胞的死亡。
使用方法:
1.取0.1~5μg质粒DNA(线性化质粒加入量5~50μg)和10μL预变性Carrier DNA,加入到未融化的100~200μL感受态细胞上,置于30℃水浴,每隔15 S颠倒混匀,直至感受态细胞刚好完全融化(融化后及时取出)。
2.加入1.4mL B2溶液颠倒混匀。30℃水浴60min,每隔20min颠倒混匀
3.3000rpm离心3min弃上清留菌体沉淀,加入1mL B3溶液重悬菌体。
4.3000rpm离心3min弃上清留菌体沉淀,加入100μL B3溶液重悬菌体。
5.将100μL菌液全部涂布到相应的平板培养基,30℃恒温培养3~5天,直至平板出现酵母克隆。
注意事项:
1.初次使用Carrier DNA,请把装有Carrier DNA的管子在沸水中煮沸5min,然后立即放在冰上,用后放在-20℃储存备用。下次使用前请于冰上解冻Carrier DNA。反复冻融3~5次后需重新变性Carrier DNA。
2.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
3.同时转化2-3种质粒时可增加质粒的用量。
4.毕赤酵母适宜的生长温度是28至30度,温度超过32度对蛋白的表达是有害的,并可能导致细胞的死亡。
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